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免疫組化試劑的操作流程,看了你就懂
更新時(shí)間:2021-11-23 點(diǎn)擊量:1868
  免疫組化試劑用于體外診斷。免疫組化試劑盒適用范圍為冰凍切片和石蠟包埋組織切片,新準(zhǔn)備好的淋巴細(xì)胞,和固定的培養(yǎng)細(xì)胞。
 
  免疫組化試劑的操作流程:
 
  (1)脫蠟和水化
 
  脫蠟前,應(yīng)將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。
 
  1)組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯后再浸泡10分鐘;
 
  2)無(wú)水乙醇中浸泡5分鐘;
 
  3)95%乙醇中浸泡5分鐘;
 
  4)70%乙醇中浸泡5分鐘;
 
  (2)抗原修復(fù)
 
  用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片。
 
  1)抗原熱修復(fù)
 
  在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)。蓋上不銹鋼高壓鍋的蓋子,但不進(jìn)行鎖定。將玻片置于金屬染色架上,緩慢加壓,使玻片在緩沖液中浸泡5分鐘,然后將蓋子鎖定,小閥門(mén)將會(huì)升起來(lái)。10分鐘后,去除熱源,置入涼水中,當(dāng)小閥門(mén)沉下去后打開(kāi)蓋子。本方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的抗原修復(fù)。
 
  2)煮沸熱修復(fù)
 
  電爐或者水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)至95℃左右,放入組織芯片加熱10~15分鐘。
 
  3)微波熱修復(fù)
 
  在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0)至沸騰后將組織芯片放入,斷電,間隔5~10分鐘,反復(fù)1-2次。適用的抗原有:AR,Bax,Bcl-2,C-fos,X-jun,C-kit,C-myc,E-cadherin,Chromogranin A,Cyclin,ER,Heat shock protein,HPV,Ki-67,MDMZ,p53,p34,p16,p15,P-glycoprotein,PKC,PR,PCNA,ras,Rb,TopoismeraseⅡ等。
 
  4)酶消化方法
 
  常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預(yù)熱至37℃,切片也預(yù)熱至37℃,消化時(shí)間約為5~30分鐘;胃蛋白酶消化37℃時(shí)間為30分鐘。適用于被固定遮避的抗原,其中有:Collagen,Complement,Cytokeratin,C-erB-2,GFAP,LCA,LN等。

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